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手术者在术中应将一次性医用手术包放在相对应的位置上，以便随时取用，并可防止互相碰撞。对锋利的器械尤应精心使用。例如不应以眼科剪刀剪粗大且坚韧的组织或纱布卷、棉卷等。
长期保存的一次性医用手术包宜涂上一层凡土林。经常使用的器械，在洗净血污后用液体石蜡擦拭，以防生锈。锋利器械和钝性器械应当分别保存。锋利器械不能用高压和煮沸消毒，仅在十分急迫的情况下，可作短时间(3分钟)的煮沸消毒．以免损害锋利的刃口。
手术室人员在消毒一次性医用手术包之前，应仔细检查手术器械是否够用、合适。例如剪刀的剪尖能否闭严，并将其两股张开再放于消毒盘中消毒。线状刀、枪状刀可用扩大镜或试鼓检查刀刃是否锋利，并用棉花将其尖端包好再行消毒。对各种环钻特别要注意拭净钻筒内的油质，擦过后，方可消毒。对每个环钻要记录其使用的次数，便于手术时挑选。还应检查虹膜镊子的两股弹性如何。
一次性医用手术包的消毒多采用含宥0.5％亚硝酸钠的1／1000新洁尔灭溶掖浸泡消毒。浸泡30分钟可达消毒的目的，加入亚硝酸钠是为了防锈。经常浸泡器械的消毒盘应每隔2~4周高压消毒一次，并更换新的消毒液。
